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PCR實(shí)驗(yàn)室的主要功能

發(fā)布日期:2020-08-26   點(diǎn)擊量:748

1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)的功能是:

貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū),試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū),應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。


2、標(biāo)本制備區(qū)的功能是:

核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于涉及臨床樣本的操作,應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。由于在樣本混合、核酸純化過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測(cè)核酸后,必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料,必須在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序。


3、核酸擴(kuò)增區(qū)的功能是:

DNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的是,所有經(jīng)過(guò)檢測(cè)的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開(kāi)。


4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的功能是:

擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測(cè)序等。核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法(放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記)、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序方法、質(zhì)譜分析等。


擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是PCR實(shí)驗(yàn)室最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此應(yīng)注意避免通過(guò)本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí),必須使用洗板機(jī)洗板,廢液必須收集至1 mol/L HCl中,并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒,而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過(guò)的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理,如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等,故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。


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