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 為避免樣本間的交叉污染，PCR負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室采用十萬級(jí)凈化系統(tǒng)設(shè)計(jì)。PCR走廊為-5Pa區(qū)域，緩沖設(shè)置為-10 Pa，各試驗(yàn)區(qū)-15Pa，確保與外界環(huán)境隔離，隔離從臨近區(qū)域進(jìn)入本區(qū)域的氣溶膠污染，同時(shí)杜絕室內(nèi)空氣外流。

   實(shí)驗(yàn)室墻體，包括頂棚，必須結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線條過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。 

1.試劑準(zhǔn)備區(qū)

   主要進(jìn)行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、振蕩器等。

1） PCR實(shí)驗(yàn)室中最為“潔凈”區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸存在，包括試劑中所帶的標(biāo)準(zhǔn)品和陽性對(duì)照，以及實(shí)驗(yàn)用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放和準(zhǔn)備處。

2） 商品試劑盒：75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水等需要自配。

3） 自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測(cè)時(shí)，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。 

2.標(biāo)本制備區(qū)

   主要進(jìn)行樣品保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有生物安全柜、超凈臺(tái)、高速臺(tái)式（冷凍）離心機(jī)、加樣器、振蕩器、冰箱、恒溫水浴等。

1） 生物安全柜不應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室門口等易受人員走動(dòng)影響的地方，也不應(yīng)直對(duì)分體式空調(diào)。

2） 用于核酸樣本的提取，標(biāo)本的制備應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，可防止標(biāo)本氣溶膠的擴(kuò)散。加樣器吸頭必須帶濾芯。

3） 使用加熱模塊時(shí)，如在模塊孔中填入二氧化硅細(xì)砂，然后將標(biāo)本管置于細(xì)砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。

4） 經(jīng)高溫溫育后的標(biāo)本，應(yīng)冷至室溫后再離心。

5） 標(biāo)本制備的全過程中都應(yīng)戴一次性手套，并經(jīng)常更換（感覺有污染時(shí)）。

6） 設(shè)備都應(yīng)定期或在有明顯污染后，使用中性消毒劑如異丙醇、戊二醇或10%次氯酸鈉溶液消毒，使用10%次氯酸鈉溶液消毒后，應(yīng)再用70%乙醇洗滌去除殘留的次氯酸鈉。

7） 生物安全：洗眼器，并配備一個(gè)急救箱，箱內(nèi)可放置75%酒精、絡(luò)合碘、棉簽、創(chuàng)可貼等必要的急用藥具。

3.產(chǎn)物擴(kuò)增區(qū)

   主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀、冰箱、離心機(jī)、加樣器等。

1） 采用“巢式”PCR方法的第二輪擴(kuò)增的加樣，必須在本區(qū)進(jìn)行。

2） 加樣時(shí)，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個(gè)即蓋好蓋子，然后加陽性質(zhì)控核酸模板，再就是標(biāo)本制備陰性質(zhì)控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應(yīng)混合液的擴(kuò)增陰性質(zhì)控，最大可能測(cè)出以前擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。

3） 熱循環(huán)儀的電源應(yīng)專用，并配備一個(gè)不間斷電源（UPS）或穩(wěn)壓電源。

4） 每次擴(kuò)增后，可使用可移動(dòng)紫外燈對(duì)擴(kuò)增熱循環(huán)儀進(jìn)行照射。

5） 擴(kuò)增儀應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)。

4.產(chǎn)物分析區(qū)

   主要用于擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備：電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、測(cè)序儀、（酶標(biāo)儀和洗板機(jī)）、核酸雜交儀、恒溫設(shè)備等。產(chǎn)物分析區(qū)是臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的最后一個(gè)工作區(qū)域，需要打開擴(kuò)增后反應(yīng)管進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物分析檢測(cè)，是PCR實(shí)驗(yàn)室“最不潔凈”的區(qū)域。